Cry2 Aa毒素结合十二肽的筛选与鉴定

• 作者: 刘媛 刘贤金 张存政 张霄 武爱华 谢雅晶 赵岩岩 赵扬
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Cry2Aa毒素 噬菌体展示肽库 ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏?质量安全
• 页码范围: 929-934
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 4503字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.04.035

摘要

利用Cry2 Aa毒素蛋白对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮筛选,并从第4轮筛选产物中随机挑选20个单克隆,进行单克隆 ELISA、PCR扩增、DNA电泳及测序,鉴定这些克隆与 Cry2Aa毒素的结合活性。结果显示,这20个克隆均能与Cry2Aa毒素发生特异性结合,并推导出8条不同的序列。挑取阳性值最高的克隆GT(氨基酸序列为GTPWHHHRHLIV)建立了基于十二肽的Cry2Aa毒蛋白的间接竞争ELISA检测方法。该方法的抑制中浓度(IC50)为1.1390μg/ml,最低检测限IC10为0.0211μg/ml,线性检测范围为0.0478~22.6910μg/ml (Y=23.09 lgx+48.692,R2=0.9963)。噬菌体展示肽库筛选方法为快速、准确地检测Cry2 Aa毒蛋白提供了新的途径。