针对潜伏结核感染的 A39 DNA 疫苗构建及其免疫原性研究

• 作者: 孔聪 宋娜 徐颖 李光华 王洪海 黄琪
• 来源期刊: 微生物与感染
• 关键词: 结核分枝杆菌 DNA疫苗 潜伏结核感染 Rv2029c Rv3425 Ag85A
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-27
• 页数: 9页
• 字数: 6251字
• 语种: 中文

摘要

选取结核分枝杆菌潜伏相关抗原Rv2029c、结核分枝杆菌优秀抗原Ag85A和Rv3425，构建针对潜伏感染的结核分枝杆菌DNA疫苗pVAX1／Ag85A-Rv3425-Rv2029c （A39），并对其免疫原性进行研究。首先用聚合酶链反应（PCR）扩增Ag85A基因，构建重组质粒pVAX1／Ag85A （A）；PCR扩增 Ag85A-Rv3425连接片段，插入pVAX1载体，构建重组质粒pVAX1／Ag85A-Rv3425（A3）；PCR扩增Rv2029c基因，插入A3，构建重组质粒pVAX1／Ag85A-Rv3425-Rv2029c （A39）。将构建成功的重组质粒转入 HEK293T细胞，蛋白免疫印迹法验证质粒在真核细胞中得到表达。在大肠埃希菌BL21中成功表达和纯化去除信号肽的Ag85A、Rv3425和Rv2029c蛋白。用质粒免疫C57BL／6小鼠，共分为5组：PBS、pVAX1、A、A3和A39组，采用电脉冲导入免疫，每2周免疫1次，共3次，用酶联免疫斑点检测（ELISPOT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术等方法检测细胞免疫和体液免疫水平。结果显示，A39免疫小鼠后，能引发强烈的细胞免疫反应﹝γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素2（IL-2）高水平分泌﹞，外周血CD4＋／CD8＋ T细胞比值增加，CD8＋穿孔素＋ T细胞比例增加。结果表明，构建的A39 DNA疫苗能引发强烈的免疫反应，显示出良好的抗结核潜力，可作为结核分枝杆菌新型候选疫苗。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洪海	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	97	667	13.0	21.0
2	李光华	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	4	11	2.0	3.0
3	宋娜	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	2	5	1.0	2.0
4	黄琪	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	5	9	2.0	3.0
5	孔聪	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	3	9	2.0	3.0