利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制HBV复制

• 作者: 史智扬 吴涛 崔仑标 朱凤才 朱小娟 樊欢 赵康辰 郭喜玲 陈银
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: CRISPR/Cas9基因编辑技术 乙型肝炎病毒 抑制
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 600-605
• 页数: 6页
• 字数: 3690字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.08.009

摘要

目的：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对乙型肝炎病毒( HBV)的特定基因进行编辑，评价其抑制HBV复制的效应。方法针对HBV的S 基因设计2套CRISPR/Cas9表达质粒并转染HepG2-N10细胞株。采用噻唑蓝( MTT)法测定细胞毒性、化学发光法检测HBsAg、荧光定量RT-PCR( qRT-PCR)法检测病毒mRNA表达水平，荧光定量PCR( qRT-PCR)法检测HBV DNA含量，高通量测序分析HBV基因组编辑情况。结果未见明显细胞毒性效应；2套针对HBV的CRISPR/Cas9表达质粒组培养基中HBsAg含量较对照组降低了24.2%(P=0.031)和16.9%(P>0.05)，细胞中HBsAg含量分别降低了16.4%(P>0.05)和32.1%(P>0.05)；S、C、X基因mRNA基因表达呈现不同程度降低；培养上清中HBV DNA含量较对照组降低了23%(P>0.05)和35%(P=0.047)，细胞中HBV DNA含量降低了7.2%(P>0.05)和18%(P>0.05)；高通量测序提示HBV基因组出现不同类型的插入/缺失突变。结论针对HBV的S 基因设计的2套CRISPR/Cas9表达质粒能通过对HBV基因组的编辑实现抑制HBV基因表达及病毒复制作用，可能为HBV治疗提供新的途径。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔仑标		25	123	5.0	10.0
2	史智扬		38	298	9.0	16.0
3	郭喜玲		28	208	7.0	14.0
4	陈银		7	18	3.0	4.0
5	赵康辰		5	9	2.0	3.0
6	樊欢		7	32	2.0	5.0
7	吴涛		10	28	3.0	5.0
8	朱小娟		5	1	1.0	1.0