HIFU通过下调miR-181a进而促进ICAM-1表达增强小鼠抗肿瘤免疫

• 作者: 孙晖 李崇雁 李欢 李雪茹 杨敏 查何 段亮 罗进勇 袁世梅
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 高强度聚焦超声 抗肿瘤免疫 microRNA 细胞间黏附分子-1
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-21
• 分类号: R394.3|R454.3|R730.51
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.201407194

摘要

目的 探讨miR-181a在高强度聚焦超声(high-intensity focused ultrasound,HIFU)增强机体抗肿瘤免疫中的作用及其机制.方法 ①皮下构建供HIFU治疗的黑色素瘤移植瘤小鼠模型,采用简单随机法随机分为HIFU组与荷瘤组,每组30只,采用MTT方法检测各组脾淋巴细胞对B16细胞的杀伤活性,ELISA检测小鼠血清及共培养上清中TNF-α及IFN-γ的表达水平;②qRT-PCR检测HIFU组与荷瘤组脾淋巴细胞中的差异miRNAs;③用生物信息学方法预测差异miRNAs的潜在靶基因,通过RT-PCR及Western blot验证靶基因的表达;④构建荧光素酶报告质粒进一步验证差异miRNAs的靶基因,再将差异miRNAs的mimics转染脾淋巴细胞,RT-PCR及Western blot检测其靶基因表达的变化,以进一步确认差异miRNAs对靶基因表达的影响.结果 ①HIFU治疗能够抑制黑色素瘤生长,促进脾淋巴细胞分泌TNF-α和IFN-γ,增强脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性;②HIFU处理明显下调脾淋巴细胞中miR-181a的表达水平(P＜0.01);③生物信息学方法预测发现共刺激分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)可能是miR-181a的潜在靶基因,且HIFU处理明显促进脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA和蛋白质的表达(P＜0.01);④miR-181a mimics显著抑制pLUC-ICAM-1-3'UTR报告质粒荧光素酶的活性(P ＜0.01),并下调脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA(P＜0.05)和蛋白质的表达(P＜0.01).结论 HIFU通过抑制miR-181a对共刺激分子ICAM-1的负调控作用从而增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫.