miR-181a真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 付玉华 吴文新 张逊 李书军 沈玉光 田刚
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 食管癌 MicroRNA 真核表达载体 pcDNA3.1(+)
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 149-151
• 分类号: R4
• 字数: 2929字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2011.02.006

摘要

目的 构建miR-181a真核表达载体,获得食管癌细胞TE11在其中稳定表达的细胞系,为研究miR-181a的功能以及其在食管癌细胞TE11中的作用机制奠定基础.方法 根据miR-181a成熟序列在基因组中的位置及其上下游250个碱基序列,以293T细胞基因组DNA为模板设计PCR引物,扩增包含miR-181a前体的序列,连接到线性化的pMD18-T Simple载体中,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后亚克隆到pcDNA3.1(+)中,并对重组质粒进行双酶切和测序分析;鉴定完全正确的重组质粒转染食管癌细胞TE11,用G418(350 mg/L)筛选4周获得miR-181a稳定表达细胞系TE11-miR-181a,提取TE11-miR-181a细胞总RNA,用real-time PCR鉴定pcDNA3.1(+)-miR-181a可在真核细胞中稳定过表达.结果 成功构建了miR-181a的真核表达载体,并获得了在TE11细胞中稳定表达重组质粒的细胞系TE11-miR-181a.结论 miR-181a真核表达载体在食管癌细胞TE11中稳定高表达,为进一步研究miR-181a在食管癌细胞TE11中的功能及基因调控机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李书军	河北医科大学第二医院胸外科	25	84	5.0	8.0
2	吴文新	河北医科大学第二医院病理科	53	200	7.0	11.0
3	田刚	天津市公安医院检验科	26	94	6.0	8.0
4	付玉华	新疆自治区人民医院分院检验科	4	14	2.0	3.0
5	沈玉光	天津胸科医院胸外科	1	2	1.0	1.0
6	张逊	天津胸科医院胸外科	5	11	2.0	3.0