人miR-16真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 余冰 倪明 吕婷婷 张小勇 杨东亮 杨银柯 江敏 陆蒙吉 陈姗姗
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因的表达与调控 microRNA miR-16 报告质粒
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-34,39
• 页数: 5页
• 分类号: Q939.93
• 字数: 3320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.01.007

摘要

目的 构建人miR-16真核表达载体,为研究其基因表达调控机制建立实验基础.方法 从人类基因组 DNA中扩增miR-16的前体序列,引入酶切位点和polyT转录终止序列,酶切后插入siRNA表达载体pSuper中,构建miR-16真核表达载体pmiR-16,然后进行酶切和测序鉴定;同时构建含miR-16完全互补序列及乙肝表面抗原HBsAg的报告质粒pXF3H-HBs.将pmiR-16与pXF3H-HBs共转染肝癌细胞系HepG2,通过HBsAg ELISA检测试剂盒检测表达产物HBsAg的改变,鉴定真核表达载体pmiR-16的生物学活性.结果 成功构建了人miR-16真核表达载体pmiR-16及其报告质粒.pmiR-16与pXF3H-HBs共转染HepG2后,pmiR-16组HBsAg的基因表达与对照组相比显著降低,证实pmiR-16转染真核细胞后具有生物学活性.结论 miR-16真核表达载体的成功构建为进一步研究其基因表达调控机制建立了实验基础.