猪ITGB1与miR-181a靶向关系的验证

• 作者: 孙敬礼 李涛 胡广东 邱梅玉 黄涛
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: miR-181a ITGB1基因 靶基因验证 表达调控 猪
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 92-96
• 页数: 5页
• 分类号: S828.2
• 字数: 3609字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.2018-12-092

摘要

实验旨在探讨猪miR-181a与整合素β1 (ITGB1)基因mRNA的靶向关系.通过生物信息学预测miR-181a与ITGB1-3'UTR的结合位点,人工合成猪ITGB1-3'UTR及突变型片段连接到双荧光素酶载体(psiCHECK-2)上,构建野生型(psiCHECK-2-W-ITGB1-3'-UTR)和突变型(psiCHECK-2-M-ITGB1-3'-UTR)双荧光酶报告载体.培养PK15细胞分别转染miR-181a mimics、negative control和psiCHECK-2-W-ITGB1-3'-UTR、psiCHECK-2-M-ITGB1-3'-UTR,用双荧光酶检测试剂盒检测荧光素酶活性,qRT-PCR检测ITGB1基因mRNA表达水平,Western blot检测ITGB1蛋白表达水平.将含psiCHECK-2-W-ITGB1-3'-UTR、psiCHECK-2-M-ITGB1-3'-UTR分别与miR-181a mimic共转染PK-15细胞.结果表明:psiCHECK-2-W-ITGB1-3'-UTR组的荧光素酶活性极显著低于其阴性对照组(P＜0.01);转染miR-181a mimics能极显著下调ITGB1基因mRNA的表达量(P＜0.01),显著下调ITGB1蛋白表达量(P＜0.05),而转染miR-181aInhibitor组和Inhibitor-NC组相比,ITGB1基因mRNA和蛋白表达量差异均不显著(P＞0.05).本研究成功构建了猪野生型及突变型ITGB1-3'-UTR双荧光素酶报告质粒,并证实miR-181a与猪ITGB1-3'-UTR存在靶向关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡广东	石河子大学动物科技学院	15	8	2.0	2.0
2	李涛	石河子大学动物科技学院	21	25	2.0	4.0
3	黄涛	石河子大学动物科技学院	58	197	7.0	10.0
4	孙敬礼	石河子大学动物科技学院	20	66	5.0	6.0
5	邱梅玉	石河子大学动物科技学院	11	9	2.0	2.0