猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立

• 作者: 周晓丽 徐丽华 方维焕 李军星 杜晓莉 王一成 袁秀芳 顾昀
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 重组N蛋白 ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 123-129
• 页数: 7页
• 分类号: S828
• 字数: 6454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2015.01.020

摘要

为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平，用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原，建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA 方法。 ELISA 的最佳工作条件是：抗原包被浓度为0．5μg／mL，包被时间4℃过夜，5％脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100；37℃作用45 min，辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG稀释度为1∶10000，37℃温育60 min，底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0．30判为阳性，OD450nm≤0．27判为阴性，介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验，结果表明，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份，总阳性率为68．5％。