基于S蛋白检测猪流行性腹泻抗体间接ELISA方法的建立

• 作者: 邓祖丽颖
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 原核表达 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 119-123
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 字数: 4832字
• 语种: 中文

摘要

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白抗体的间接ELISA方法,应用RT-PCR方法扩增PEDV河南流行毒株S基因794 bp片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建pET-32a-S重组质粒并转化至宿主茵BL21,在37℃条件下加入IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE分析显示,该蛋白以融合蛋白形式高效表达,分子量约为46.9 kD;Western-blot分析表明,所表达的重组蛋白具有良好的反应原性.以纯化的S蛋白为包被抗原建立检测PED抗体的间接ELISA方法,试验确定抗原最佳包被量为0.04 μg/孔,血清最佳稀释度为1∶100,HRP-IgG二抗最佳稀释度为1∶2000,阳性判定标准为OD450值≥0.24.应用该方法对采自河南省不同地区23个养猪场的279份血清样本进行检测,结果显示,母猪血清样本PED抗体阳性率为97.42％(227/233);育肥和保育猪血清样本阳性率为71.74％ (33/46).试验结果表明,所建立的间接ELISA方法特异性、灵敏性和可重复性良好,可以用于猪群PED抗体水平监测和流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邓祖丽颖		22	84	6.0	8.0