稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的U937白血病细胞株的建立及初步特性分析

• 作者: 刘玲玲 林东军 范蕊芳 赖文兴
• 来源期刊: 中山大学学报（医学科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: U937细胞株 p62 载体构建
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 670-675
• 页数: 6页
• 分类号: R733.7
• 字数: 3191字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对U937细胞的影响.[方法]首先在空载体MSCV-IRES-GFP (MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进行病毒包装,并感染U937细胞,用流式细胞分选仪分选出绿色荧光细胞,获得U937-GFP和U937-p62稳定细胞株,利用流式细胞仪及Western blot分别检测GFP细胞的阳性率及p62蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定U937-GFP和U937-p62细胞的生长情况,流式细胞术检测髓系细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达情况.[结果]荧光显微镜观察结果显示,MIG和MPIG病毒感染后,U937-GFP和U937-p62细胞均表达绿色荧光蛋白;经流式细胞仪分选后,U937-GFP和U937-p62细胞中GFP阳性表达率分别达98.5％和87.3％.Western blot的结果显示U937-p62细胞中p62蛋白表达较U937-GFP显著升高.MTT实验结果显示,与U937-GFP细胞相比,U937-p62细胞的生长速率加快.流式结果显示U937-GFP细胞和U937-p62细胞表达细胞表面分化抗原CD1 1b及CD14无明显差异.[结论]成功构建了p62基因过表达的U937稳定细胞株,过表达p62可促进U937细胞增殖,并不能促进U937细胞的分化.