猕猴结核IFN-γ体外释放检测法的建立与初步应用

• 作者: 任习东 姜勇 李翔 汪乾坤 童胜涛 胡长敏 郝丽影 陈焕春 陈颖钰
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猕猴 结核 IFN-γ ELISA 结核菌素皮试检测 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1488-1494
• 分类号: S852.618
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.09.17

摘要

旨在建立猕猴结核IFN-γ体外释放检测法,用于猴结核病的特异性诊断.从猕猴外周血白细胞克隆了猕猴IFN-γ(Macaca mulatta IFN-γ,Mm IFN-γ)基因,在大肠杆菌中表达,获得重组MmIFN γ.利用杂交瘤细胞技术获得12株高效价的单克隆抗体.用所获得的单克隆抗体及兔抗IFN-γ多克隆抗体建立了检测猴IFN γ的夹心ELISA,检测灵敏度达到62.5 ng/L.用所建立的IFN-γ检测法与进口商品化试剂盒符合率为93.84％,具有很好的一致性(κ-0.779 3).以眼睑皮内变态反应法(皮试法)为标准方法,先用皮试法检测146只猕猴,再用进口商品化的IFN γ检测试剂盒(MABTECHTM)检测猕猴外周血淋巴细胞在牛和禽结核菌素刺激下释放的IFN-γ量,利用ROC曲线确定猕猴结核IFN-γ检测法的临界值为114.5 ng/L,对皮试法的灵敏性为68.18％,特异性为91.94％.同时,本试验检测的猕猴的结核阳性率为17.12％,提示结核病对猕猴群的健康存在重大威胁.本试验建立了猕猴结核IFN γ体外释放检测法,为猕猴结核病检测提供了新型技术手段.