不同转染试剂对慢病毒包装及包装后病毒感染豚鼠成纤维细胞效率的影响

• 作者: 何承文 何玉龙 吴月红 邵风慧
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因转染 慢病毒 绿色荧光蛋白 豚鼠 成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 34-38,295
• 页数: 6页
• 分类号: Q25
• 语种: 中文

摘要

为了研究不同转染试剂对慢病毒载体包装效率及包装后病毒感染细胞的能力,试验利用磷酸钙、脂质体2000、脂质体LTX和QuickShuttle-293转染编码绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因的重组慢病毒载体进入293T细胞包装病毒,包装的病毒感染豚鼠成纤维细胞,通过流式细胞仪检测转染试剂的转染效率和病毒感染效率,同时利用MTT法检测了4种转染试剂的细胞毒性.结果表明:磷酸钙在转染效率、转染后细胞活力及包装后病毒对豚鼠成纤维细胞的感染效率都最低,分别为(54.8±2.9)％、(26.7±6.0)％和(7.6±1.1)％;脂质体2000和脂质体LTX对293T细胞转染效率差异不显著(P＞0.05),但脂质体LTX转染后细胞活力显著高于脂质体2000(P ＜0.05),即脂质体LTX的细胞毒性显著低于脂质体2000.而QuickShuttle-293法转染后的转染效率、转染后细胞活力和其包装后的病毒对靶细胞的感染率分别为(95.5±1.8)％、(88.5±5.7)％和(93.3±1.O)％,都显著高于其他三种转染试剂(P＜0.05).说明在本试验条件下,QuickShuttle-293是一种高效、低毒的慢病毒转染包装试剂,可用于通过病毒载体介导的基因转染技术制备豚鼠诱导多能性干细胞(iPS).