xyl-d二型乙醇脱氢酶（SADH）G198R突变体的研究

• 作者: 刘志斌 杨毅 韩俊 马诗淳
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: SADH PCR定点诱变技术 xyl-d
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 187-192
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 2632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0490-6756.2015.01.033

摘要

本研究通过设计简并引物及文献参考,PCR 克隆得到嗜热厌氧菌菌株 xyl-d 的SADH,并利用定点诱变技术将该酶的198位苷氨酸(Gly)突变为精氨酸(Arg)。将野生型和突变基因连接到原核表达载体pET28a,IPTG诱导表达,再经镍柱纯化,然后比较了两个蛋白分别以 NAD/NADH,NADP/NADPH 为辅因子、异丙醇或异丁醛为底物、55℃条件下的酶活。发现突变后蛋白的总体催化活性相对于野生型有所下降,其中突变蛋白对 NAD/NADH 的亲和性分别下降了约8倍和6倍,而且对NADPH 的亲和性下降也非常明显,但对NADP的亲和性变化却不大。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨毅	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	121	269	7.0	9.0
2	刘志斌	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	31	82	5.0	7.0
3	韩俊	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	5	13	3.0	3.0
4	马诗淳	四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室	1	1	1.0	1.0