鲜奶中肠出血性大肠杆菌O157∶ H7的定量PCR检测

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 周萍 张强 张碧成 张雪寒 李彬 汪伟 温立斌
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 荧光定量PCR 鲜奶
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏?质量安全
• 页码范围: 1173-1178
• 页数: 6页
• 分类号: S851.34+7.502
• 字数: 4941字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2015.05.036

摘要

为建立鲜奶中肠出血性大肠杆菌( Enterohaemorrhagic E. coli, EHEC) O157∶ H7的特异性检测方法,以EHEC O157∶ H7独有的遗传标志性基因Z0372为靶序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有Z0372基因的重组质粒作为标准品进行Taqman荧光定量PCR反应,分析该方法的敏感性、特异性,并检测鲜奶样品以验证Taqman荧光定量 PCR实用性和可靠性。结果表明,建立的定量PCR方法在1μl 1×101拷贝至1μl 1×106拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.996,扩增效率112%。该方法的检测灵敏度为1μl 70拷贝,敏感性较高,而且特异性良好,与其他血清型大肠杆菌、沙门氏杆菌和志贺氏菌等易混淆菌株核酸之间没有交叉反应。批间和批内检测的变异系数( RSD)低于2%,表明该方法重复性良好。