一种新的大丽轮枝菌基因敲除载体的构建

• 作者: 宋雯 张婷 毛建才 高云 高峰
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大丽轮枝菌 基因敲除 绿色荧光蛋白基因 农杆菌介导转化
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 页码范围: 1878-1883
• 页数: 6页
• 分类号: S188+.2
• 字数: 4208字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2015.010.017

摘要

[目的]研究大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)致病基因的功能,构建一个便于筛选敲除转化子的高效基因敲除载体.[方法]通过普通PCR技术扩增得到绿色荧光蛋白基因(GFP),连接到pMD18-T载体上,测序验证,利用限制性内切酶HindⅢ将目的片段切下,连接到敲除载体pRF-HU2的多克隆位点上.通过电击转化法将载体转化到农杆菌EHA105中,利用农杆菌介导法(ATMT)转化到大丽轮枝菌.[结果]成功得到一种新的携带GFP筛选标记的大丽轮枝菌敲除载体,通过GFP基因的筛选,T-DNA随机插入转化子在荧光显微镜下呈现绿色,相反敲除转化子在荧光显微镜下不呈现绿色.[结论]构建了一种大丽轮枝菌基因新的高效敲除载体,利用该载体大大节省了筛选转化子所用的时间,为大丽轮枝菌功能基因的验证提供了技术平台.