SH2-ODC/AZ1腺病毒的构建及对BCR-ABL蛋白的降解效应

• 作者: 冯文莉 徐敏 钟梁 陶崑 高淼 黄峥兰
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: BCR-ABL 抗酶蛋白1 SH2结构域 鸟氨酸脱羧酶
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 301-305
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4402字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2015.04.18

摘要

目的 构建重组腺病毒Ad-SH2-ODC和Ad-AZ1,检测共表达SH2-ODC和AZ1蛋白对BCR-ABL癌蛋白的降解效应.方法 PCR扩增src同源结构域2(src homology 2,SH2)、鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)及抗酶蛋白1(antizyme 1,AZ1)基因,构建携带SH2-ODC(SO)或AZ1基因的pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒,经双酶切和测序鉴定后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,获得重组腺病毒质粒.后者经PacⅠ酶切鉴定后,在人胚肾细胞系AD293中包装、扩增,获得重组腺病毒;腺病毒Ad-SO和Ad-AZ1共感染人白血病细胞系K562,western blot检测目的蛋白的表达.结果 双酶切和测序证实,腺病毒穿梭质粒构建正确;PacⅠ酶切结果显示,重组腺病毒质粒构建成功;western blot证实目的蛋白在K562细胞中表达正确,共表达SO和AZ1可以降低BCR-ABL蛋白水平.结论 成功构建了Ad-SO和Ad-AZ1重组腺病毒,共表达SO和AZ1可以降解K562细胞中的BCR-ABL蛋白.