白绒乌鸡MITF基因的cDNA克隆、表达及其对黑色素沉积的影响

• 作者: 刘凤辉 朱志明 李丽 缪中纬 辛清武 郑嫩珠 黄勤楼
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 白绒乌鸡 黑色素 小眼畸形相关转录因子 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 3711-3718
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.18.014

摘要

[目的]克隆白绒乌鸡小眼畸形相关转录因子(microphthalmia- associaated transcription factor, MITF)基因序列,研究MITF 基因在白绒乌鸡各组织中的表达,探索其对白绒乌鸡体内黑色素沉积的影响,为深入研究乌鸡体内黑色素沉积的内在调控机制奠定理论基础.[方法]以150日龄健康的白绒乌鸡为研究对象,采用简并引物和巢式PCR方法从白绒乌鸡皮肤组织中克隆 MITF基因cDNA序列,通过DNAStar、Clustal X、BioEdit和MEGA4.0等软件对获得的序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR法和紫外分光光度法分别研究白绒乌鸡各组织 MITF 基因的表达特性和黑色素的沉积规律,并应用线性回归方法分析白绒乌鸡各组织 MITF基因表达量与黑色素沉积之间的相关性.[结果]经测序和拼接,最终获得了长度为1 431 bp的白绒乌鸡 MITF基因的cDNA序列 (登录号: KC879241),该序列包含1个完整的CDS区(25—1 431 bp),编码468个氨基酸,预测蛋白分子量为52.42 kD,等电点为6.47;结构域分析发现该基因编码的氨基酸具有1个保守的基础-螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链(bHLH-zip)结构.同源比对结果表明,该基因CDS区氨基酸序列与原鸡的同源性高达100%;与其他鸟类同源性达98%以上,与哺乳动物同源性为90%左右;氨基酸系统进化树显示,白绒乌鸡MITF与原鸡的亲缘关系最近,与猪和人的亲缘关系最远.荧光定量PCR结果表明 MITF 基因表达量在白绒乌鸡各组织间差异达极显著水平(P<0.01),其中以皮肤表达量最高,大约为肾的2.9倍、肌胃的4.4倍、肝的11.4倍、肌肉的86.2倍;紫外分光光度计检测结果显示各组织黑色素的沉积规律与各组织 MITF 基因的表达规律大体相似,总体趋势表现为皮肤>肾>肌胃>肝>肌肉.相关分析表明,白绒乌鸡组织中 MITF基因的表达量与黑色素含量呈显著的正相关关系(P<0.05).[结论]MITF 基因在动物进化中高度保守,该基因表达具有组织特异性,对白绒乌鸡体内黑色素沉积起正向调控作用,其高表达可能有助于乌鸡体内黑色素的形成.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄勤楼	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	99	869	17.0	24.0
2	朱志明	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	80	366	9.0	13.0
3	郑嫩珠	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	85	403	10.0	13.0
4	缪中纬	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	79	362	9.0	13.0
5	辛清武	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	48	193	7.0	11.0
6	李丽	福建省农业科学院畜牧兽医研究所	25	96	6.0	9.0
7	刘凤辉		2	16	1.0	2.0