摘要:
莆田黑鸭(Anas anas domesticus)是我国唯一的黑羽蛋鸭地方品种,为中国珍贵稀有的水禽资源.小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associtated transcription factor,MITF)作为黑色素细胞最重要的转录因子,可通过α-MSH (melanocyte-stimulating hormone)诱导,与cAMP应答原件结合蛋白(cAMP responsive element binding protein,CREB)结合作用于cAMP,激活MITF基因在黑色素细胞中特异表达,对于黑色素的合成具有关键作用.为探讨莆田黑鸭各组织MITF基因的表达特性,及其与真黑色素在莆田黑鸭各组织中沉积规律的相关性,本研究利用巢式PCR方法,首次从莆田黑鸭皮肤组织克隆MITF基因(GenBank No.MG516571),并进行了序列分析.进而利用实时荧光定量PCR方法检测莆田黑鸭各组织的MITF基因表达,利用紫外分光光度法测定莆田黑鸭各组织真黑色素的沉积量,应用线性相关分析方法分析莆田黑鸭各组织MITF基因表达与真黑色素沉积的相关性.结果表明,莆田黑鸭MITF基因长度为1 341bp,包含完整的CDS序列(12~1334 bp);编码440个氨基酸,与绿头鸭(Anas platyrhynchos)的氨基酸同源性为100%,与原鸡(Gallus gallus)、鹌鹑(Coturnix japonica)等鸟类的氨基酸同源性在95%以上.遗传进化分析发现,莆田黑鸭MITF与绿头鸭的亲缘关系最近,与鸿雁(Anser cygnoides)、白绒乌鸡(Silky flow)、原鸡等亲缘关系次之,与猪(Susscrofa)、绵羊(Ovis aries)等哺乳动物的亲缘关系最远.实时荧光定量PCR分析发现,MITF基因mRNA表达量以莆田黑鸭皮肤组织最高,极显著高于其他各组织(P<0.01);各组织依次为:皮肤>肾脏>肌胃>肝脏>肌肉.紫外分光光度计检测结果显示,莆田黑鸭各组织真黑色素的沉积规律与各组织MITF基因的表达量基本一致;其中肝脏组织MITF基因表达量与真黑色素含量呈显著正相关(P<0.05).综上所述,MITF基因在莆田黑鸭中的表达具有组织特异性,可能对真黑色素的沉积具有正向调控作用;MITF可作为黑色素沉积调控的主效候选基因.本研究为莆田黑鸭黑色素性状的选择提供了基础资料.