SIRT1启动子表达调控载体的构建和活性分析及AML1-ETO对其转录活性的影响

• 作者: 于力 周蕾 李丹丹 李永辉 王利军 王茜 王莉莉 窦立萍
• 来源期刊: 中国实验血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SIRT1基因 荧光素酶报告基因 基因表达调控 基因转染 转录调控 AML1-ETO阳性白血病
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 白血病基础与临床
• 页码范围: 12-18
• 页数: 7页
• 分类号: R733.7
• 字数: 3993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7534/j.issn.1009-2137.2015.01.003

摘要

目的:本研究旨在分析AML1-ETO阳性白血病中SIRT1基因的表达及调控机理,寻找SIRT1核心启动子区域.方法:利用实时定量PCR方法在AML1-ETO阳性白血病细胞株和白血病临床样本中研究SIRT1基因的表达情况;构建SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,分析其在293T细胞中的活性.采用PCR方法从含有SIRT1基因转录起始位点5'区的基因片段中扩增SIRT1基因核心启动子序列,插入经Xho Ⅰ和HindⅢ双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-Basic,采用阳离子脂质体SuperFect包裹荧光素酶报告重组子转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.采用双荧光素酶报告基因检测方法,研究AML1-ETO对SIRT1启动子转录活性的调节作用.结果:AML1-ETO的表达与SIRT1的表达呈正相关;成功构建了6种SIRT1基因序列的荧光素酶报告重组子,并通过了酶切以及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告重组子在293T细胞中的荧光素酶活性明显高于阴性对照,明确了SIRT1基因核心启动子位置;研究结果证明融合蛋白AML1-ETO可以正向调控SIRT1启动子活性,SIRT1对AML1-ETO阳性白血病发生发展的影响.研究表明:SIRT1可能是AML1-ETO的靶基因之一.结论:成功构建了SIRT1基因启动子-荧光素酶报告载体,找到了SIRT1基因核心启动子区,且核心启动子在293T细胞中有较高的活性.AML1-ETO通过促进SIRT1启动子的活性对其进行转录调控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于力	解放军总医院血液科	174	1205	17.0	25.0
2	李丹丹	解放军总医院血液科	19	169	6.0	12.0
3	窦立萍	解放军总医院血液科	35	177	7.0	12.0
4	王茜	解放军总医院血液科	8	64	4.0	8.0
5	王莉莉	解放军总医院血液科	28	109	7.0	9.0
6	王利军	解放军总医院血液科	6	47	3.0	6.0
7	李永辉	解放军总医院血液科	6	26	3.0	5.0
8	周蕾	解放军总医院血液科	1	1	1.0	1.0