自杀质粒同源重组方法构建弗氏志贺菌htrA可控表达菌株

• 作者: 冯尔玲 刘红胜 徐萍 朱力 杨晶 王恒樑 陆丽兰
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 志贺菌,弗氏 htrA基因 自杀质粒同源重组 阿拉伯糖操纵子 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 354-356,402
• 页数: 4页
• 分类号: R378.25
• 字数: 2777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.05.008

摘要

目的：构建弗氏志贺菌HtrA蛋白的可控表达菌株。方法构建自杀质粒同源重组载体，利用重组方法在基因组htrA前插入阿拉伯糖启动子，同时构建并导入外源表达AraC蛋白的表达载体，实现对HtrA蛋白的可控表达；在此基础上，通过蛋白印迹实验，检测诱导前后全菌以及周质中HtrA蛋白的表达情况。结果测序结果表明，自杀质粒同源重组载体以及外源表达载体构建成功；蛋白印迹实验结果显示，对比阿拉伯糖诱导菌株，未诱导菌株中基本未检测到HtrA蛋白的表达。结论自杀质粒同源重组方式可在无阿拉伯糖时有效阻遏HtrA蛋白的表达；同时在诱导后，还可恢复HtrA蛋白的正常表达，有利于后续功能研究。