抗牙龈卟啉单胞菌卵黄抗体的制备、纯化和生物学特性鉴定

• 作者: 孟明理 宋礼华 徐振山 徐燕 沈继龙 董瑶 马倩
• 来源期刊: 牙体牙髓牙周病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 牙龈卟啉单胞菌 免疫球蛋白Y 卵黄抗体
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 459-464,497
• 页数: 7页
• 分类号: R780.2
• 字数: 5769字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.08.002

摘要

目的:制备特异性抗牙龈卟啉单胞菌( Pg)的鸡卵黄免疫球蛋白( IgY)并检测其生物学特性. 方法:厌氧培养牙龈卟啉单胞菌,将甲醛灭活的菌体经翅膀下浅层肌肉免疫150日龄罗曼母鸡3次,每次间隔10 d. 取鸡蛋用两步硫酸铵沉淀法提取IgY,BCA法测定蛋白质含量,ELLSA法检测纯化后IgY的特异性和抗体效价变化,并进行 SDS-PAGE 和 Western blotting 分析. 观察抗 Pg-IgY 对红细胞凝集的抑制作用.结果:经3次免疫后,抗体滴度最高可达25 600,纯化后每个鸡蛋可得约70 mg IgY抗体;SDS-PAGE分析,纯化的IgY有1条主要蛋白带,相对分子质量( Mr)为180 kD,纯度为65%; Western blotting分析, 该IgY抗体可识别抗原Pg. 每孔3. 125 μg Pg-IgY可有效抑制Pg的红细胞凝集活性;1 mg/mL Pg-IgY可有效抑制Pg生长.结论:本研究得到的IgY特异性强,产量和纯度高.