茎环引物实时定量PCR技术用于检测异核苷修饰的siRNA的可行性研究

• 作者: 刘欣洁 张礼和 杨振军 王雨斯 马元
• 来源期刊: 中国科学（化学）
• 关键词: 茎环引物实时定量PCR 异核苷 绝对定量 双标准曲线法
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 710-718
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.1360/N032015-00029

摘要

本文考察了茎环引物实时定量PCR技术用于定量检测D-/L-异核苷(D-/L-isoNA)修饰的siRNA的可行性.根据阈值循环数(Ct值)及异核苷修饰的siRNA模板的初始浓度的对数值(lgC)绘制了标准曲线,与siRNA的标准曲线进行对比,发现D-异尿苷(D-isodU)修饰的siRNA (D-isodU-siRNA)不影响茎环引物实时定量PCR过程,而L-isodU修饰的siRNA (L-isodU-siRNA)降低了逆转录效率,而使测得的Ct值偏高,且对逆转录效率的影响有浓度依赖性和修饰位点特异性.因此,对前者既可进行绝对定量也可进行相对定量,对于后者只能进行绝对定量.将上述方法应用于isodU-siRNA血清稳定性的检测,获得了更可靠的定量结果.运用双标准曲线法,可进行胞内isodU-siRNA的定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张礼和		69	165	8.0	12.0
2	杨振军		39	20	2.0	4.0
3	王雨斯		1	0	0.0	0.0
4	马元		4	0	0.0	0.0
5	刘欣洁		1	0	0.0	0.0