萝卜硝酸还原酶基因的克隆与表达分析

• 作者: 徐良 柳李旺 武悦 王娟娟 谢洋 龚义勤
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 萝卜 基因表达 硝酸还原酶基因(NR) NO3--N处理
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 205-211
• 分类号: S631.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.02.005

摘要

[目的]为揭示萝卜(Raphanus sativus L.)硝酸还原酶基因(RsNR)的分子特征,降低硝酸盐含量,对萝卜RsNR基因进行分离与表达特性研究.[方法]基于本实验室转录组测序所得unigene序列分离RsNR基因cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析,采用RT-qPCR方法对不同浓度KNO3(0、5、20、30和50 mmol·L-1)和不同时间(0、4、8、12和24 h)处理的萝卜中RsNR基因表达进行检测,并测定硝酸盐含量和硝酸还原酶活性(NRA).[结果]获得萝卜RsNR基因cDNA序列(GenBank登录号:KM272859),开放阅读框为2 742 bp,编码913个氨基酸,RsNR与油菜NR基因(D38219)氨基酸序列相似性为95％.在30 mmol·L-1 NO3--N诱导下,萝卜叶片和根中RsNR基因表达量最高.在30 mmol· L-1 NO3--N诱导初期,叶片和根中RsNR表达量4h达到最大值,随后呈下降趋势;随着硝酸盐处理浓度升高,NRA、硝酸盐含量和RsNR基因表达量均呈先升后降趋势,0～4h内叶片和根中三者均上升,4～24 h内NRA和RsNR基因表达下降,而硝酸盐含量呈上升趋势.[结论] NO3--N可能在转录水平上调控萝卜RsNR基因表达,进而影响其硝酸盐含量和NRA.