亚硝酸还原酶基因克隆、表达与纯化

• 作者: 于爽 张庆芳 王晓辉 窦少华 迟乃玉 魏计东
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 木糖氧化产碱菌DL-1 含铜亚硝酸还原酶(CuNiR) 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2017,（14）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 101-105
• 页数: 5页
• 分类号: TS201.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2017.14.020

摘要

该研究通过聚合酶链反应(PCR)方法从木糖氧化产碱菌(Achromobacter xylosoxidans DL-1)基因组DNA中成功克隆含铜亚硝酸还原酶基因.PCR测序表明该基因全长1083个核苷酸,编码360个氨基酸,预测其理论分子质量约38.924 kDa,等电点(pI)4.83,命名为CuNiR(Genbank登录号KX674378).结构域分析该蛋白编码区包含信号肽,1个铜离子结合位点,1个氧化还原酶催化域.将CuNiR基因构建到pET22b载体,并转化至大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示目的蛋白可溶表达.利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,酶活检测显示比活力为123.82 U/mg,为后期含铜亚硝酸还原酶(CuNiR)的生化性质表征奠定理论基础.