木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达

• 作者: 刘琼 孙鑫泽 张雪 曲宁宁 毕云枫 陈萍
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 亚硝酸盐还原酶 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 690-693
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7694/jldxyxb20130410

摘要

目的:对木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因(nir)进行克隆并表达,并测定酶的活力,探讨亚硝酸盐还原酶(NiR)对亚硝酸盐的降解特性.方法:提取木糖氧化产碱菌DNA,根据GenBank公布的nir基因序列设计引物,利用PCR技术扩增nir基因,克隆至表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-nir,通过双酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得重组蛋白.将细胞发酵液超声破碎,提取粗酶,测定酶活力.结果:经PCR扩增及测序鉴定得到长度为1 083 bp的目的片段；经终浓度0.6 mmol·L-1 IPTG、30℃诱导表达5h,获得相对分子质量为37 000的重组蛋白；在pH6.5、反应温度35℃时,测得酶活力为51.74U·mL-1.结论:成功克隆nir基因,在大肠杆菌BL21 (DE3)中获得表达,且表达产物有酶活.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张雪	吉林农业大学食品科学与工程学院	26	51	3.0	5.0
2	毕云枫	吉林农业大学食品科学与工程学院	42	117	6.0	9.0
3	陈萍	吉林农业大学食品科学与工程学院	60	235	9.0	12.0
4	曲宁宁	吉林农业大学食品科学与工程学院	4	15	3.0	3.0
5	刘琼	吉林农业大学食品科学与工程学院	8	18	3.0	4.0
6	孙鑫泽	吉林农业大学食品科学与工程学院	3	6	2.0	2.0