一种 gRNA 快速合成及检测方法的建立

• 作者: 杜建勇 邓然 雍伟东 高虹
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 PCR扩增 体外转录 体外检测
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 267-271,290
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3590字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2015.03.009

摘要

目的：建立一种gRNA快速合成及检测的方法。方法设计引物并利用PCR技术迅速扩增gRNA的DNA模板片段，然后通过体外转录纯化得到gRNA；最后通过体外反应迅速对gRNA和Cas9酶切效率及特异性进行检测。结果体外合成的gRNA特异性强，活性高，在靶点上成功切开DNA双链。结论成功建立gRNA快速合成及检测的方法，为后续转染或显微注射筛选有活性gRNA节约了时间。