应用TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪肝中戊型肝炎病毒的研究

• 作者: 周少君 李柏生 林虹 柯昌文 梁辉 管大伟 邓小玲 钟贤武
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肝 戊型肝炎病毒属 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 检验技术
• 页码范围: 171-175
• 页数: 5页
• 分类号: R440
• 语种: 中文
• DOI: 10.13217/j.scjpm.2015.0171

摘要

目的 建立适用于猪肝样本中戊肝病毒检测的荧光RT-PCR方法.方法 采用匀浆处理直接提取法(方法一)与聚乙二醇处理法(方法二)两种处理方法对染毒猪肝样本进行病毒富集,针对4种型别戊肝病毒的基因组而设计的特异性引物和探针,建立一套TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并评价该方法的准确性和灵敏性.采用新建荧光定量RT-PCR检测人工染毒的猪肝样本并比较两种方法的处理效率.结果 所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR标准曲线显示在102 ～ 108 copies/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999.批内和批间重复性实验结果表明,不同浓度的质粒标准品检测所获得的Ct值的变异系数分别在0.11％ ～3.75％、2.47％ ～ 6.62％间.2种方法均可以检测出102 copies/μL的染毒猪肝中戊肝病毒拷贝数.结论 所建立的TaqMan 荧光定量RT-PCR方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强等特点,适用于HEV的定量检测.匀浆处理直接提取法更加快捷,适用于长期监测.