干扰水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)非结构蛋白Pns6的表达阻碍病毒在褐飞虱体内的增殖

• 作者: 刘宇艳 李俊钦 贾东升 郭年梅 陈红燕 魏太云
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 水稻齿叶矮缩病毒(RRSV) RNA干扰(RNAi) 褐飞虱 Pns6蛋白 增殖
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1486-1493
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2015.11.012

摘要

水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)由介体褐飞虱(Nilaparvata lugens)以持久增殖型方式传播.RRSV编码的非结构蛋白6(nonstructural protein 6,Pns6)是病毒原质的组分,但其在介体昆虫传毒中的功能未知.本研究利用dsRNA诱导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究Pns6蛋白在病毒侵染介体昆虫中的功能.通过膜饲喂法将源于Pns6基因的dsRNA (dsPns6)以及源于绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的dsRNA(dsGFP)分别导入2龄褐飞虱体内,并以饲喂10％蔗糖的处理为对照,之后于病株上获毒2d.应用免疫荧光标记技术检测发现,昆虫获毒9d后,dsGFP和10％蔗糖处理组褐飞虱的带毒率分别为27％和30％,而dsPns 6处理组褐飞虱的带毒率仅为10％;同时qRT-PCR检测发现,Pns6蛋白的表达量受到抑制后,病毒编码的结构蛋白P8和P9的表达量也显著下降(P＜0.05).此外,dsGFP和10％蔗糖处理组褐飞虱的传毒率分别为20％和22％,干扰Pns6蛋白的表达后褐飞虱的传毒率仅为6％.研究结果表明,Pns6是RRSV在褐飞虱体内增殖的重要蛋白,抑制Pns6的表达显著降低褐飞虱的带毒率并抑制病毒的增殖,同时削弱褐飞虱的传毒能力,明确了Pns6可作为理想的靶标用于阻断RRSV在褐飞虱体内的增殖.