野生型枯草芽孢杆菌N4的spizizen转化法优化

• 作者: 冯凤兆 冯露 成小松 成毅 李春艳
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 野生型枯草芽孢杆菌 spizizen转化法 有机溶剂 溶菌酶 SDS-PAGE
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 78-82,108
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 4709字
• 语种: 中文

摘要

采用经典Spizizen方法将已构建的大片段重组质粒pHT01-nit（nit为腈水解酶基因）转化野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4，无法获得转化子。研究对Spizizen方法进行改进，分别在感受态制备及转化过程中加入有机溶剂及溶菌酶，并对有机溶剂种类、浓度，溶菌酶浓度，质粒与感受态共培养时间进行优化，提高转化效率，构建Bacillus subtilis N4-pHT01-nit。经IPTG诱导，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacryamide gel electro?phoresis, PAGE）验证nit在野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis N4中的表达。结果表明，最优条件为在感受态制备过程中添加4%的Tween-80，转化过程中添加5μg·mL-1溶菌酶，感受态与质粒共培养时间为1 h，条件优化后可得到37个转化子·μg-1 DNA。在SDS-PAGE上可以看到与腈水解酶分子质量一致的蛋白条带。说明该优化后的方法效果明显，适合于大片段重组质粒转化野生型枯草芽孢杆菌。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成小松	哈尔滨医科大学第一临床医学院	38	175	7.0	11.0
2	李春艳	东北农业大学资源与环境学院	34	186	8.0	12.0
3	冯凤兆	东北农业大学资源与环境学院	1	4	1.0	1.0
4	冯露	东北农业大学资源与环境学院	5	13	3.0	3.0
5	成毅	东北农业大学资源与环境学院	1	4	1.0	1.0