柔嫩艾美耳球虫AMA1蛋白多克隆抗体的制备及在乳酸乳球菌中的表达

• 作者: 张跃 杨贵君 洪琴 潘龙 王芬 马德星 马春丽 高铭扬 黄宇晨
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 顶膜抗原 多克隆抗体 乳酸乳球菌
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1130-1135
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2015.11.005

摘要

将柔嫩艾美耳球虫子孢子顶膜抗原AMA1胞外域基因片段(EtAMA1)克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-30a(+)-EtAMA1.质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况.用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.应用间接ELISA测定抗体效价,并采用Western-blot检测抗体特异性.将EtAMA1克隆入乳酸菌表达载体pTX8048中构建阳性质粒pTX8048-EtAMA1,质粒电转化入宿主菌乳酸乳球菌(Lacto-coccus lactis)NZ9000中筛选阳性菌pTX8048-EtAMA1-L.lactis NZ9000.阳性菌经Nisin诱导后采用Western-blot检测目的蛋白的表达情况.结果表明,EtAMA1在大肠杆菌中以包涵体形式表达.多克隆抗体的效价为218.Western-blot检测证实,制备的抗体可与子孢子反应.重组菌pTX8048-EtAMA1-L.lac-tis NZ9000经Nisin诱导后,采用Western-blot检测到约61 ku的目的蛋白.上述研究结果为基于EtAMA1的鸡球虫病乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨贵君		11	37	4.0	6.0
2	高铭扬		6	6	2.0	2.0
3	马德星		30	75	5.0	7.0
4	潘龙		12	45	5.0	6.0
5	马春丽		19	158	9.0	12.0
6	张跃		4	9	2.0	3.0
7	王芬		3	2	1.0	1.0
8	洪琴		4	6	1.0	2.0
9	黄宇晨		2	2	1.0	1.0