禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白调控宿主菌DNA检测方法的建立与应用

• 作者: 刘红梅 周秀红 尹磊 涂健 王惠珂 王曼 祁克宗
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽致病性大肠杆菌 PhoP蛋白 宿主菌DNA 检测方法
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 645-649
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.04.018

摘要

[目的]建立检测禽致病性大肠杆菌PhoP蛋白调控宿主菌DNA的方法,为进一步研究PhoP蛋白的调控因子奠定基础.[方法]将phoP基因克隆至pMD19-T载体,序列鉴定正确后转至表达载体pET32a,将重组质粒pET32a-phoP导入感受态细菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的大小,用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组PhoP蛋白.通过生物信息学分析法对PhoP蛋白与DNA的结合基序进行预测,利用凝胶迁移试验(EMSA)鉴定该蛋白的结合活性.[结果]酶切及测序结果表明原核表达质粒构建正确;SDS-PAGE结果表明目的基因得到表达;重组目的蛋白相对分子质量约为42.9× 103;用Ni-NTA亲和层析柱成功纯化获得了纯度大于90％的目的蛋白;凝胶迁移试验结果表明PhoP蛋白能够结合血清毒力基因iss和溶血基因hlyF启动子区.[结论]禽致病性大肠杆菌PhoP重组蛋白成功表达且有结合iss和hlyF基因启动子区的功能活性,说明PhoP蛋白能够调控iss和hlyF的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘红梅	安徽农业大学动物科技学院	36	105	5.0	8.0
2	祁克宗	安徽农业大学动物科技学院	172	1178	18.0	24.0
3	周秀红	安徽农业大学动物科技学院	21	103	7.0	9.0
4	涂健	安徽农业大学动物科技学院	71	391	11.0	16.0
5	尹磊	安徽农业大学动物科技学院	3	11	2.0	3.0
6	王曼	安徽农业大学动物科技学院	6	62	4.0	6.0
7	王惠珂	安徽农业大学动物科技学院	5	16	2.0	4.0