慢病毒载体表达外源PON1对小鼠巨噬细胞的影响

• 作者: 喻红 孟冰 徐延勇 曹佳 杜芬 程力维
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 对氧磷酯酶1 慢病毒载体 巨噬细胞 TNF-α
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1-5,35
• 分类号: R363.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2015.01.001

摘要

目的:为探讨对氧磷酯酶1(PON1)在机体代谢性疾病中的作用及机制,本实验构建含人源性PON1基因的慢病毒表达载体,研究其表达分泌PON1的能力及对小鼠巨噬细胞的影响.方法:根据人肝cDNA文库的PON1序列设计特定引物,定点诱变PCR获得两端为Pme Ⅰ内切酶位点的目的基因,经酶切连接到pWPI-GFP载体上,筛选及DNA测序鉴定.磷酸钙法瞬时转染293T细胞,荧光显微镜观察GFP表达反映转染效率,WesternBlotting检测细胞培养基中PON1分泌表达量,采用对氧磷为底物检测PON1活性.含PON1的培养基与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,ELISA法检测氧化条件下细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的水平.结果:构建的pWPI-PON1慢病毒表达载体序列正确,高效转染293T细胞(转染效率可达到80％-90％)可有效分泌表达PON1至培养基,显著提高培养基PON1活性,与对照组相比,培养基中PON1可明显抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-6的分泌(P＜0.01).结论:pWPbPON1慢病毒载体高效表达分泌的外源PON1能有效降低巨噬细胞的炎症反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	喻红	武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系	50	208	7.0	12.0
2	曹佳	武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系	18	40	4.0	5.0
3	杜芬	武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系	11	22	2.0	4.0
4	孟冰	武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系	1	2	1.0	1.0
5	徐延勇	武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系	1	2	1.0	1.0
6	程力维	武汉大学基础医学院生物化学与分子生物学系	1	2	1.0	1.0