不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选

• 作者: 侯喜林 刘同坤 李英 钱瑜
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 不结球白菜 Pol胞质雄性不育(Pol CMS) 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-26
• 分类号: S634.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2015.01.004

摘要

[目的]构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花酵母双杂交cDNA文库,筛选与细胞色素C还原酶铁硫蛋白(BcRISP1)互作的蛋白.[方法]从不结球白菜Pol胞质雄性不育花中提取总RNA,通过长距离PCR,扩增双链cDNA(ds cDNA).采用SMART建库技术构建不结球白菜Pol胞质雄性不育花全长cDNA文库.利用BcRISP1基因的开放阅读框,构建诱饵表达载体pGBK T-7-BcRISP1转化AH109酵母菌,根据酵母双杂交技术筛选出与BcRISP1互作的片段,并进行质粒共转化验证.[结果]经检测,文库的转化率为每μg pGADT7-Rec 1.80× 106转化子,文库滴度为1.21×107 CFU·mL-1,重组率为94％,成功构建可以用于酵母双杂交的cDNA文库.酵母双杂交技术获得了与BcRISP1互作的阳性克隆,试验表明诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用,质粒共转化试验初步验证了BcRISP1与CYP81G、PIP2蛋白的互作关系.[结论]cDNA文库的成功构建为后期互作蛋白的顺利筛选奠定了基础,利用酵母双杂交技术成功获得与BcRISPl互作的蛋白CYP81G和PIP2,为明确不结球白菜Pol胞质雄性不育相关基因的信号传递通路提供更多的依据,以期从分子水平上进一步阐明不结球白菜Pol胞质雄性不育的机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯喜林	南京农业大学园艺学院	294	4133	31.0	48.0
2	李英	南京农业大学园艺学院	22	145	8.0	11.0
3	刘同坤	南京农业大学园艺学院	5	5	2.0	2.0
4	钱瑜	南京农业大学园艺学院	1	3	1.0	1.0