蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因克隆、表达与免疫反应性的鉴定

• 作者: 卢思奇 吴玲 贾彦娟 魏勤 魏超君
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 蓝氏贾第鞭毛虫 α8-贾第素 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 172-175
• 分类号: R382.213
• 语种: 中文

摘要

目的 对蓝氏贾第鞭毛虫的α8-贾第素(α8-giardin)基因进行克隆和表达,并检测其免疫反应性.方法 利用PCR方法获得α8-贾第素基因开放阅读框(ORF)片段,经双酶切将其连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达载体pET30a(+)-α8-giardin.经PCR和酶切鉴定后,将该载体转化入大肠埃希菌(E.coli) BL21(DE3),筛选出阳性菌落并诱导其表达.经亲和层析柱纯化后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测重组蛋白. 结果 自蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA扩增得到约930 bp的α8-贾第素基因片段.经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体pET30a (+)-α8-giardin构建成功.SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示.α8-贾第素重组蛋白以非可溶性形式存在于包涵体中,相对分子质量(Mr)约为36 000,可被抗His标签抗体和兔抗贾第虫血清识别. 结论 克隆蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因,纯化的重组α8-贾第素蛋白具有免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢思奇	首都医科大学病原生物学系	58	267	8.0	12.0
2	吴玲	甘肃省人民医院临床检验中心	18	98	5.0	9.0
3	贾彦娟	甘肃省人民医院临床检验中心	11	56	5.0	7.0
4	魏超君	甘肃省人民医院临床检验中心	10	23	3.0	4.0
5	魏勤	甘肃省人民医院临床检验中心	8	18	2.0	4.0