铜绿假单胞菌 Psl 多糖转运蛋白 PslD 的表达与纯化研究

• 作者: 吴更 唐玮蔚 马旅雁
• 来源期刊: 微生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 胞外多糖 转运蛋白PslD 去垢剂 亲和层析
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 页码范围: 14-21
• 页数: 8页
• 分类号: Q939.11+2
• 字数: 5574字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-7021.2015.01.003

摘要

条件性致病菌铜绿假单胞菌是细菌生物被膜研究的模式菌，其分泌的胞外多糖 Psl 在生物被膜形成中起关键作用。PslD 为 Psl 多糖的转运蛋白，由256个氨基酸构成，生物信息学分析揭示其有 N 端信号肽且为一次跨膜蛋白。分离纯化完整跨膜蛋白需要去垢剂的作用，去垢剂种类繁多且性质不一，研究设计了一套筛选溶解 PslD 的去垢剂的方案。通过抗组氨酸标签的 Western blot 分析，n-Decyl-β-D-maltopyranoside（DM）， n-Decyl-N，N-dimethylamine-N-oxide（DDAO）及 n-Dodecyl-N，N-dimethylamine-N-oxide（LDAO）被认为溶解 PslD的效率较高。通过改变总蛋白与去垢剂比例，进一步优化了去垢剂的溶解条件，即8 mg/ mL 总蛋白：质量分数为1%的 LDAO。在此溶解条件下，仅通过第一步 Ni 柱亲和纯化目的蛋白纯度可到达80%以上，这为进一步结晶尝试及其结构生物学研究奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴更	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	14	11	2.0	3.0
2	唐玮蔚	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
3	马旅雁	中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室	5	13	2.0	3.0