靶向人喉癌 HEP2细胞 Trop2基因的siRNA 构建及鉴定

• 作者: 吴昊 李贤斌 费兵 陈小玲
• 来源期刊: 山东大学耳鼻喉眼学报
• 学科: 医学
• 关键词: 喉肿瘤 HEP2细胞 Trop2 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 51-53,58
• 页数: 4页
• 分类号: R739.6
• 字数: 2435字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6040/j.issn.1673-3770.0.2014.381

摘要

目的：构建能高效干扰 Trop2基因的 siRNA，转染人喉癌 HEP2细胞，并初步鉴定其干扰效果。方法以人Trop2基因为靶基因，设计合成3条针对不同作用位点的 siRNA 干扰序列，用脂质体法将各小干扰序列瞬时转染人喉癌 HEP2细胞，同时设立阴性对照、空白对照，分别命名为 W 组（未转染组）、NC 组（阴性对照组）、T1组（S1序列组）、T2组（S2序列组）及 T3组（S3序列组），每组各5例。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达，计算转染效率。转染24 h 后，收集稳定后细胞，采用实时荧光定量 PCR 法检测各干扰序列对 Trop2基因表达的抑制效果。结果荧光显微镜下观察，见 HEP2细胞表达绿色荧光蛋白，证实 siRNA 已转入细胞，转染率达90％。RT-PCR 法结果显示，与未转染组、阴性对照组相比，转染 siRNA 的人喉癌 HEP2细胞中 Trop2表达均受到抑制，与 T2、T3组相比，T1组对 Trop2 mRNA 的抑制作用最明显，差异有统计学意义（0．470±0．063 vs 0．749±0．024，0．824±0．027，P ＜0．05）。结论成功构建并筛选出了能高效、特异沉默人喉癌 HEP2细胞 Trop2基因的 siRNA 序列，为进一步研究 Trop2基因在喉癌中的作用机制及其基因治疗奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴昊	南通大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科	36	61	5.0	6.0