人C型凝集素受体dectin-1单克隆抗体的制备

• 作者: 姜远英 朱乐乐 杨龙 王英 贾鑫明
• 来源期刊: 药学服务与研究
• 学科: 医学
• 关键词: C型凝集素受体 dectin-1 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 95-98,146
• 分类号: R392.5|R967
• 语种: 中文
• DOI: 10.5428/pcar20150204

摘要

目的:克隆获得并原核表达人dectin-1基因的胞外段,以其作为抗原,制备人C型凝集素受体dectin-1的单克隆抗体.方法和结果:利用RT-PCR技术从人的外周血中克隆获得人dectin-1基因,克隆到pCDNA 3.0(+)载体中,获得pCDNA3.0(+)-dectin-1质粒.将dectin-1胞外段[dectin-1(202 bp-744 bp)]克隆到pET28a(+)载体,构建原核表达质粒pET28a(+)-dectin-1(202 bp-744 bp),转到大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中,IPTG诱导目的片段原核表达,得到高效表达的dectin-1(202 bp-744 bp),镍柱亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,取抗体滴度高的小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得1 5株阳性杂交瘤细胞株,利用有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞株的筛选,获得5株单克隆细胞株.用单克隆细胞株制备小鼠腹水模型,经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化获得dectin-1的单克隆抗体.经蛋白质印迹法验证,此单克隆抗体能有效地识别人和小鼠的dectin-1蛋白.结论:成功制备获得dectin-1蛋白的特异、高效的单克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜远英	第二军医大学药学院新药研究中心	190	1570	18.0	30.0
2	王英	第二军医大学长海医院皮肤科	34	232	9.0	13.0
3	杨龙	第二军医大学药学院新药研究中心	2	3	1.0	1.0
4	朱乐乐	同济大学医学院免疫学教研室	2	0	0.0	0.0
5	贾鑫明	同济大学医学院免疫学教研室	5	11	2.0	3.0