1型登革病毒包膜蛋白功能区在293 T细胞中的表达与鉴定

• 作者: 丁细霞 易海粟 温坤 狄飚 车小燕 郭勇晖 陈静
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 1型登革病毒 包膜蛋白 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 459-463
• 页数: 5页
• 字数: 4589字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.06.012

摘要

目的：在293T细胞中获得可溶性表达的1型登革病毒（DENV1）包膜（E）蛋白。方法PCR扩增DENV1-E蛋白功能区（1～394 aa）基因并克隆到Psectag2B-Fc真核表达载体中构建表达质粒，脂质体法转染293T细胞，经2 mg／ml Zeocin筛选，免疫荧光法鉴定所获细胞克隆；Protein-G亲和层析纯化DENV1-E-Fc重组融合蛋白，间接免疫荧光和蛋白免疫印迹法鉴定蛋白的完整性和抗原性。结果获得稳定可溶性表达重组融合蛋白的细胞克隆，蛋白产量约为25μg／1×107个细胞，纯化得到的DENV1-E-Fc蛋白相对分子质量约90×103，该蛋白可与识别天然构象E蛋白的单克隆抗体结合，并与免疫动物血清有良好的反应性。结论在真核细胞中成功获得可溶性表达的DENV1-E-Fc重组融合蛋白，E蛋白功能区保持完整且具备天然的构象表位和良好的抗原性，为包膜蛋白的保护性抗原表位和功能研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	车小燕	南方医科大学珠江医院检验医学部临床医学实验中心	49	197	8.0	9.0
2	陈静	南方医科大学珠江医院检验医学部临床医学实验中心	93	592	14.0	19.0
3	狄飚	广州市疾病预防控制中心病毒科	70	659	13.0	22.0
4	郭勇晖	南方医科大学珠江医院检验医学部临床医学实验中心	6	23	3.0	4.0
5	易海粟	南方医科大学珠江医院检验医学部临床医学实验中心	2	1	1.0	1.0
6	丁细霞	南方医科大学珠江医院检验医学部临床医学实验中心	14	45	4.0	6.0