HIV-1包膜蛋白ENV慢病毒载体的构建及表达

• 作者: 任大勇 刘存霞 孙丹丹 朱娜 李太元 李昌 李沂 杜寿文 秦艳青 金宁一
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: ENV HIV-1 慢病毒载体 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 440-443
• 分类号: Q786
• 字数: 4090字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2012.05.014

摘要

目的 构建表达HIV-1包膜蛋白ENV的慢病毒载体,感染人胚肾细胞HEK293T,观察env基因在HEK293T中的表达.方法 通过点突变获得HIV-1 env完整基因,将env基因亚克隆至慢病毒穿梭载体pLVX-IRES-ZsGreen1的EcoRⅠ、XhoⅠ位点,构建重组质粒pLV-env,采用脂质体转染法转染HEK293T,经RT-PCR、Western blot检测目的基因表达,同时利用激光共聚焦技术对env基因的表达进行了定位.结果 成功获得了HIV-1 env基因,构建了重组慢病毒质粒pLV-env,RT-PCR、Western blot检测均表明外源基因能够表达,并具有抗原性,同时env基因表达后可以分泌到细胞膜表面膜上.结论 成功构建了含有HIV-1包膜蛋白env基因的重组慢病毒质粒,并验证了其表达,为下一步慢病毒的包装以及细胞模型和动物模型的构建奠定了基础.