广西HIV-1 B亚型假病毒的构建

• 作者: 余军 叶力 宁传艺 廖艳研 梁冰玉 梁浩 王洪 蒋俊俊 陈荣凤 黄春湲 黄颉刚
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: HIV-1 假病毒 耐药检测
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1942-1946
• 页数: 5页
• 字数: 3705字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2018.12.006

摘要

目的 针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具.方法 从质粒pSV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒pNL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组骨架质粒;采用RT-PCR方法从HIV-1 B亚型慢性感染者RNA中获得包膜蛋白基因,采用双酶切法将env基因克隆至真核表达质粒pcDNATM3.1 (+),以此构建重组包膜质粒;单转染重组包膜质粒至293t细胞验证表达;共转染重组质粒至293t细胞获得假病毒;采用与TZM-b1细胞共培养法,通过荧光表达检测验证假病毒感染性.结果 两种质粒以质量比2:1(pcDNA3.1-env:pNL4-3.EGFP.E-R-)共转染至293t细胞,48 h后收集细胞上清获得假病毒.将假病毒加入到TZM-bl细胞共培养48 h后,可以观察到荧光表达.结论 带有EGFP基因重组假病毒的系统构建成功.