华支睾吸虫间接ELISA检测方法的建立及初步应用

• 作者: 杜爱芳 杨怡 潘辰 陈学秋
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 华支睾吸虫 Enolase蛋白 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1792-1798
• 分类号: S852.72
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.11.13

摘要

RT-PCR扩增华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)的Enolase基因后,进行原核表达,采用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物;以纯化后的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对工作条件进行优化.结果表明,ELISA最佳工作条件为:抗原最佳包被质量浓度为5 mg/L,37℃1h再4℃过夜;5％脱脂奶粉,37℃封闭1 h;待检血清1∶100稀释37℃孵育1 h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育45 min;TMB显色作用时间10 min;确定的阴阳性血清临界值为0.253.所建立的ELISA方法特异性较好,可检测犬华支睾吸虫病阳性血清,与犬卫氏并殖吸虫病阳性血清、犬蛔虫病阳性血清、犬弓形虫病阳性血清、犬新孢子虫病阳性血清均不发生反应.该方法敏感性为1∶3 200.批间批内重复性试验变异系数均小于10％.在临床应用中,对浙江地区353多份犬血清的检测表明,样品阳性率为1.13％.本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床病例的血清学快速检测,为华支睾吸虫的血清流行病学调查提供了有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜爱芳	浙江大学动物科学学院	78	635	14.0	22.0
2	杨怡	浙江大学动物科学学院	25	49	4.0	6.0
3	陈学秋	浙江大学动物科学学院	10	10	2.0	2.0
4	潘辰	浙江大学动物科学学院	1	3	1.0	1.0