日本七鳃鳗MIF多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 徐玉海 李庆伟 梁宏芳 潘雄 逄越
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 巨噬细胞移动抑制因子 日本七鳃鳗 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1082-1087
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20150228

摘要

目的 以日本七鳃鳗(Lampetra japonica)类淋巴细胞为研究对象提取总RNA,通过RT-PCR方法获得七鳃鳗MIF基因对其进行生物信息学分析.方法 将MIF基因构建到原核表达载体pET-28a上,诱导表达并纯化MIF蛋白.以可溶表达的MIF蛋白免疫新西兰兔,应用间接ELISA方法和Western blot方法检测多克隆抗体.结果 ELISA检测抗体效价为1:512 000;Westernblot结果显示该多克隆抗体能特异性的结合重组和天然MIF蛋白;流式细胞术分析确定了19.36％的七鳃鳗类淋巴细胞表达MIF分子;激光共聚焦分析技术确定MIF分子主要定位于七鳃鳗类淋巴细胞的细胞浆中.结论 重组MIF蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为七鳃鳗免疫功能方面的相关研究奠定了基础.