阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子的原核表达 及多克隆抗体制备

• 作者: 凌薇 刘卿 卢叶 唐昌霞 姜旭淦 曹建平 朱昱蓉 朱莉 朱雨莲 陈盛霞
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 阴道毛滴虫 巨噬细胞迁移抑制因子 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 17-20
• 页数: 4页
• 分类号: R382.21
• 字数: 3133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y180170

摘要

目的:原核表达阴道毛滴虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor of Trichomonas vaginalis,TvMIF)并制备多克隆抗体.方法:采用PCR技术扩增TvMIF基因,并克隆至pTG19-T载体,酶切及测序鉴定后,再定向插入pET-30a(+)载体.将重组载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导蛋白表达.采用镍柱亲和层析法纯化TvMIF蛋白,并免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,蛋白质印迹法检测多克隆抗体.结果:从阴道毛滴虫cDNA中扩增出TvMIF基因片段,测序结果与基因库收录序列一致.成功构建pET-30a-TvMIF重组质粒,重组TvMIF蛋白约为15.5 kDa,以可溶性蛋白形式存在.获得TvMIF重组蛋白的多克隆抗体,蛋白印迹法检出TvMIF的特异性条带.结论:成功获得阴道毛滴虫MIF蛋白并制备了多克隆抗体,可用于后续研究阴道毛滴虫致病机制.