醛酮还原酶AKR1C3基因的原核表达及其生物学活性

• 作者: 于源华 刘传志 李艳红 杨惠宇 武成 牛莹莹 陈元安
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 醛酮还原酶AKR1C3 原核细胞 基因表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 461-467
• 分类号: Q554+.2|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达醛酮还原酶AKR1C3基因,并探讨其生物学活性.方法 经人工合成醛酮还原酶AKR1 C3基因,克隆至质粒pET-15b中,构建重组表达质粒pET-15b-AKR1C3,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析镍柱纯化.采用荧光分光法检测酶活性,确定AKR1C3的最适底物,并检测金属离子对酶活的影响.用纯化蛋白分别免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔,ELISA法检测动物血清中抗体水平,并对免疫后的兔进行血常规和生化检验,对兔和小鼠进行病理学检查.采用MTT法进行细胞毒理试验.结果 重组质粒pET-15b-AKR1 C3经双酶切及PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约36 000,可溶性蛋白占菌体总蛋白的27％,纯化后纯度达95％以上.睾丸酮为AKR1C3最适底物,酶活为100.086 U;金属离子Cu2+、K+可提高AKRIC3酶活;小鼠血清中最高效价为5×104,兔血清中最高效价为6.25× 104.AKR1C3对动物肝、肾等器官均有损害.AKR1 C3对癌细胞生长抑制作用低于正常细胞.结论 醛酮还原酶AKR1C3在E.coli BL21(DE3)中成功表达,并获得高纯度、高活性的酶,对细胞生长有抑制作用,对动物肝、肾等器官均有损害,为诊断及治疗多种癌症提供实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于源华	长春理工大学生命科学技术学院	110	396	10.0	14.0
2	李艳红	长春理工大学生命科学技术学院	23	96	5.0	8.0
3	刘传志	长春理工大学生命科学技术学院	16	34	2.0	5.0
4	牛莹莹	长春理工大学生命科学技术学院	2	6	2.0	2.0
5	陈元安	长春理工大学生命科学技术学院	2	6	2.0	2.0
6	杨惠宇	长春理工大学生命科学技术学院	2	5	1.0	2.0
7	武成	长春理工大学生命科学技术学院	2	6	2.0	2.0