一种高效的葡萄球菌基因敲除方法的建立与应用

• 作者: 朱涛 李朝品 段芹 瞿涤
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 基因敲除 葡萄球菌 反向选择 限制修饰系统
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1098-1102
• 页数: 5页
• 分类号: R378.1
• 字数: 2992字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2015.12.003

摘要

目的 建立一种高效构建葡萄球菌基因敲除突变株的方法.方法 通过融合PCR将vraSR操纵子上、下游同源片段连接起来;通过基于位点特异性重组的Gateway克隆技术将融合PCR产物连接入温度敏感型穿梭质粒pKOR1,转化修饰缺陷型大肠杆菌DC10B,获得同源重组质粒pKOR1-vraSR;电转化表皮葡萄球菌RP62A株;在高温和氯霉素双重选择压力下,质粒通过第1次同源重组整合到表皮葡萄球菌染色体上;转移到无抗生素的培养基中继续培养,发生第2次同源重组;将菌液涂布于含1 μg/mL脱水四环素的培养基上进行反向筛选,那些未发生重组的整合菌株因表达必需基因secY的反义RNA而无法生存,最后,挑取菌落通过PCR进行鉴定.结果 成功构建了难以转化的表皮葡萄球菌RP62A株的vraSR基因敲除突变株.结论 利用大肠杆菌DC10B和穿梭质粒pKOR1对葡萄球菌进行基因敲除的方法简便高效,适用的范围更广泛.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李朝品	皖南医学院医学寄生虫学教研室	235	781	13.0	17.0
2	朱涛	皖南医学院医学寄生虫学教研室	9	8	2.0	2.0
3	段芹	皖南医学院口腔医学院	1	0	0.0	0.0