H7 N9流感病毒血凝素HA在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析

• 作者: 刘波 吴军 唱韶红 巩新 徐威 王莎
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: H7 N9流感病毒 血凝素类 毕赤酵母 红细胞凝集抑制
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 448-452
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3889字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.06.009

摘要

目的：利用毕赤酵母表达制备H7N9流感病毒血凝素[HA 1～525个氨基酸（aa）]，并对其免疫原性进行研究。方法经全基因合成获得H7N9流感病毒[A／Hangzhou／1／2013（H7N9）]全长HA，以其为模板，PCR得到片段HA1－525，通过NspⅤ和NotⅠ双酶切连入pPICZαA载体，转入毕赤酵母X33，ELISA筛选阳性克隆。发酵培养后，表达上清经PEG20000沉淀获取HA1－525，并用糖苷内切酶H（ endo H）酶切分析其N-糖链。将制备的HA1－525免疫BALB／c小鼠，经ELISA检测特异性HA7抗体滴度，红细胞凝集抑制实验分析血抑活性。结果培养上清用抗HA7抗体经ELISA检测，重组菌成功表达HA7，且Western印迹检测发现有特异性弥散条带，经endo H 酶切后， HA1－525为均一条带，相对分子质量约58×103，与理论大小相当，表明HA1－525存在甘露糖基化结构。 HA1－525两次免疫小鼠后可产生1∶36000的抗体滴度。以H7N9裂解苗为抗原，检测其血抑活性为1∶700。结论利用毕赤酵母表达的H7N9流感病毒HA1－525可以诱导小鼠产生针对HA7的中和抗体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘波	军事医学科学院生物工程研究所	32	100	6.0	9.0
2	吴军	军事医学科学院生物工程研究所	55	227	8.0	13.0
3	巩新	军事医学科学院生物工程研究所	33	121	6.0	10.0
4	唱韶红	军事医学科学院生物工程研究所	34	141	6.0	11.0
5	徐威	沈阳药科大学生命科学与生物制药学院	53	192	8.0	12.0
6	王莎	军事医学科学院生物工程研究所	1	6	1.0	1.0