b型流感嗜血杆菌多糖间接竞争ELISA检测方法的建立

• 作者: 廖国阳 朱文勇 王明清 管娇琼 龙艺
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: b型流感嗜血杆菌 多糖 间接竞争ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 623-627
• 分类号: R378.4+1|R393-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖间接竞争ELISA检测方法,并进行验证及初步应用.方法 以Hib多糖一酪胺结合物(PRP-Ty)作为包被抗原,待测PRP作为竞争抗原,与Hib抗血清反应,建立间接竞争ELISA检测方法.采用棋盘法确定最佳包被多糖抗原浓度及Hib抗血清稀释倍数,绘制标准曲线,并确定最低检测限;对建立的方法进行批内和批间精密性验证;取Hib发酵液,在培养温度、接种量等因素相同的情况下,分别将培养液初始pH调至6.0±0.02、7.0±0.02和8.0±0.02,培养不同时间取样,采用建立的方法检测培养液内PRP含量.结果 PRP-Ty的最佳包被浓度为1.25 μg/ml,Hib抗血清的最佳稀释倍数为300倍.该方法检测的线性范围为6.25～ 200 ng/ ml,最低检测限为6.25 ng/ ml,回归方程为y=-23.12x+99.62,R2=0.996.采用该方法分别重复检测3次高浓度(200 ng/ml)和低浓度(20 ng/ml)PRP多糖的变异系数(CV)分别为1.608％和3.344％;采用该方法及传统化学检测法分别检测6次同一批Hib成品分装疫苗的多糖,该方法检测结果的CV值为5.75％,传统化学法检测结果的CV值为1.98％,均符合要求;该方法检测不同初始pH培养液培养的Hib发酵液,培养时间为8h左右时,PRP产量最高;当初始pH为8.0±0.02时,培养液内PRP含量增长最快,所达到的浓度最高.结论 建立了Hib多糖间接竞争ELISA检测方法,该方法灵敏度较高,精密性良好,可应用于Hib多糖含量的定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廖国阳	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	19	85	6.0	9.0
2	王明清		2	8	2.0	2.0
3	管娇琼		2	8	2.0	2.0
4	朱文勇	中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所	6	2	1.0	1.0
5	龙艺	苏州大学医学部基础医学与生物科学学院	1	2	1.0	1.0