多拷贝GnRH类似物的原核表达及其纯化

• 作者: 付加芳 徐晓斌 杨阳 王世立
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 促性腺激素释放激素 生物活性小肽 多拷贝串联表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 266-270
• 分类号: Q575|Q789
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)类似物,并进行纯化.方法 人工合成8拷贝GnRH类似物基因,并利用同尾酶技术构建16拷贝的GnRH类似物基因,将8和16拷贝串联的GnRH类似物基因分别克隆至pGEX-2t原核表达载体上,构建GnRH类似物基因多拷贝串联表达的重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21,利用优化后的IPTG诱导表达条件表达的重组GnRH类似物蛋白经Glutathione Sepharose 4B柱纯化并酶解后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 质粒pGEX-2t-8GnRH analogue和pGEX-2t-16GnRH analogue经双酶切及测序证明构建正确.当IPTG终浓度为0.2 mmol/L,37℃诱导2h时,破菌后上清中目的蛋白表达量最高.表达的重组蛋白相对分子质量约37 000,可与兔抗GnRH单克隆抗体特异性结合,纯化后的重组蛋白相对分子质量约1 400,蛋白浓度约260 μg/ml.结论 已成功构建GnRH类似物多拷贝基因重组质粒,并在大肠埃希菌中高效表达,为多拷贝法生产生物活性小肽GnRH类似物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王世立	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室	38	201	8.0	12.0
2	杨阳	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室	2	3	1.0	1.0
4	付加芳	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室	9	10	2.0	2.0
7	徐晓斌	山东省医药生物技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室	1	0	0.0	0.0