荧光纳米颗粒标记技术快速检测产enterotoxin B金黄色葡萄球菌的实验研究

• 作者: 向辉 孙世宏 张汉斌 朱海 李颖 柳勤
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌肠毒素B 荧光纳米颗粒 单(多)克隆抗体 偶联 快速检测
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 微生物检测方法
• 页码范围: 1359-1362,1365
• 页数: 5页
• 分类号: R378.11
• 语种: 中文

摘要

目的 通过制备SA肠毒素B(enterotoxin B)荧光纳米颗粒单克隆抗体,探讨产enterotoxin B的SA快速检测方法.方法 将已构建好的重组质粒载体PET-28a-enterotoxin B转化入E.coli BL21(DE3),进行株中诱导表达,获得表达蛋白,免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体.再免疫Bal b/c小鼠,制备单克隆抗体荧光纳米颗粒偶联物.最后将多克隆抗体包被,制成免疫层析检测试纸条,并设质控线.将不同浓度的标准菌株混入样品中,收集提取液,在反应杯中与荧光纳米颗粒-单抗偶联物和试纸条共同反应5 min,紫外光下肉眼观察结果.结果 实验克隆分子量为798 bp的enterotoxin B基因片段,构建的重组质粒载体能高效表达,获得分子量为34.5 kD的目的蛋白质.单克隆抗体荧光颗粒偶联物与阳性菌株特异性反应,阴性对照菌株无反应.结论 研制的荧光纳米颗粒-enterotoxin B单克隆抗体偶联物特异性强、稳定性好且灵敏度高,实现短时间内对产enterotoxin B的SA快速检测.