东亚钳蝎钙通道样毒素的重组表达及活性研究

• 作者: 张曼 覃媛 顾少菊 黄劭
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: 东亚钳蝎 钙通道毒素 重组表达 细胞内钙离子
• 年，卷（期）: 2015,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2611-2614
• 页数: 4页
• 字数: 3483字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2015.16.007

摘要

目的:原核表达东亚钳蝎钙通道样毒素,分离纯化并初步探讨其生物学活性. 方法:将东亚钳蝎钙通道样毒素 BmCa 基因重组到 PET-GST 表达载体中, 转化入大肠杆菌 BL21 并 IPTG 诱导表达, Ni-SuperChelating Resin 柱亲和层析纯化融合蛋白,尿素梯度透析法复性融合蛋白,采用激光共聚焦显微镜观察其对大鼠骨骼肌细胞内钙浓度的影响.结果:成功构建PET-GST-BmCa 原核表达质粒,诱导后表达分子量约为33 kD 的融合蛋白,经亲和层析得较高纯度的融合蛋白,复性后激光共聚焦扫描显微镜检测显示表明重组蛋白能可逆性的升高骨骼肌细胞内[Ca2+]i. 结论:成功构建PET-GST-BmCa 重组质粒,获得BmCa基因工程菌株, 并表达纯化得到可作用于钙通道的重组蝎毒素蛋白.